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miRNA荧光定量PCR试剂盒
目前,最常◎用的检测和定量miRNA的方法是northern杂交, 芯片(microarrays)以『及核糖核酸酶保护分析(ribonuclease protection assays),这些传统方法都】需要标记探针并与纯化的RNA进行杂交。由于⊙成熟的miRNAs及其前体共享一段相同的靶序列,而目前基于杂交的各种技术又无法通过分子大小将它们区分,因此很难专↓一性的识别成熟miRNAs,结果导致很高的前体背景信号。?
此外,基于〗杂交的各种技术需要标记步骤或放射性↓同位素,所得数据的动态分布范围又很有限,使得miRNAs的检测非常困难、费时且昂贵。
1 Hairpin-itTM miRNAs RT-PCR? Quatitation Assay 包括两步
1) Stem-loop RT?
2) Real-time PCR
Stem-loop RT primer 与miRNA 分子的3’端结合,然后用逆转录酶将RNA逆转录成cDNA;
将得到RT产物与miRNA特异引物以及荧光々标记的Molecular Beacon probes一〗起进行优化的real-time PCR反应。
2 Hairpin-itTM miRNAs RT-PCR Quantitation Kit 的特点
1) 高度特异,特异性的Stem-loop RT primer与miR-specific Molecular Beacon probe双重保证,确保反应不受其前体及其他因素干扰;序列高度同源的miRNAs也可精确区分;
2) 超宽的定量线性范围和高度检测灵敏度,从几个拷贝一直到几万个拷贝,定量线性范围跨越◤7个数量级;
3) 样品消耗量少,仅需1-10ng total RNA;
4) 适用的样品范◣围广,total RNA、细胞裂解物以及纯化的RNA都可以用于qRT-PCR 的模板,即使基因组DNA的污染也不会干扰miRNA的定量;
5) 金牌质量的miRNA标准ㄨ合成物,即可精确用来作标准曲线■绝对定量之用,又可用来作相≡对定量的阳性对照
6) 操作快速简单,可实现RT与PCR反应一步完成;
7) 重复性好,经过吉玛公司经验丰富的技术人员严格的质量检验。
3 Hairpin-itTM?miRNAs?RT-PCR Quantitation Kit?的产品ㄨ订购信息
Hairpin-itTM??miRNAs RT-PCR Quantitation Kit | ||
目录号 | 规格 | 价格 |
E01006 | 50?rxns | ¥600 |
E01007 | 100 rxns | ¥1,100 |
E01008 | 200rxns | ¥2,000 |
E01009 | 300rxns | ¥2,500 |
E01005 | 500 rxns | ¥3,600 |
4 Hairpin-itTM?miRNAs RT-PCR Quantitation Kit 的〇成分组成
ROX Reference Dye 是用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,需要使用低浓度 ROX Reference Dye 校正的仪器有Applied Biosystems 7000/7300/7500/7500 Fast/7900 Real-Time PCR System,配套ROX 终浓度1×(0.4 μl);需要使用高浓度ROX Reference Dye 校正的 仪器有Applied Biosys-tems Step One Plus Real-Time PCR System 和QuantStudio系列,配套ROX 终浓度为5×(2 μl)。其他品牌仪器不需要ROX校准,ROX Reference Dye需要避光保存→。
5 Hairpin-itTM? miRNAs?RT-PCR Quantitation Kit?的适用∏机型
适用的荧光定量PCR仪器ABI PRISM 7000/7300/7500/7900 MJ-opticon、Opticon2、Chromo4 及QuantStudio系列、MX3000p/4000 Bio-Rad IQ系列、Light Cycler、Rotogene3000、FTC-2000。
Hairpin-itTM miRNAs RT-PCR Quantitation Kit提供的是利用实时荧光定量PCR对总 RNA中的miRNA检测与定量的一种方法,其不但灵敏而且极具特异性。miRNA 是由动物、植物和病毒基因组所编码的一种→短小,单链,约有19-23个核苷 酸组成的RNA,成熟的miRNA参与组成“RNA诱导的沉默复合体”,并且指▲导该 复合体△进行转录、转录后翻译的抑制或是特异性的内切靶mRNA。与一般的 miRNA检测方法不同,该Hairpin-itTM miRNAs RT-PCR Quantitation Kit具有更快速,更灵敏的特点。
该试剂盒♀内有miRNA特异的逆转录引@物,以及PCR正反向引物套装,并且 还带有荧光ξ 染料,茎-环结构样的miRNA特异逆转录引物以及高度特异的正反向引物使得逆转录和PCR反应避免了miRNA前体的干扰,而反应♀的模板可以是 总RNA或者细胞裂解物。
2) 良好光学PCR板或PCR管
为了⌒ 消除在荧光检测的步骤中由于 PCR 管或是 PCR96 孔板所带来的误实验数据:吉玛公司的miRNA检测试剂盒具有良好的线性动态范围和灵敏度:
miRNA 逆转录引物的操作∏
Component
|
Final Con.
|
Vol/1 rxns
|
5×RT buffer
|
1×
|
4.00 μl
|
dNTP(10 mM)
|
0.375 mM
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0.75 μl
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U6 snRNA/ miRNA RT primers(1 μM)1
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60 nM
|
1.20 μl
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MMLV Reverse Transcriptase(200 U/μl)
|
40 U
|
0.20 μl
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RNA Sample 2
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1-3 μg
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X μl
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RNase Free H2O
|
|
To 20 μl 3
|
miRNA 逆转录产物的操作?? ? ? ??
Component | Final Con. | Vol /1 rxns |
2× Real-time PCR Master Mix(SYBR)
|
1× | 10μl |
miRNA/U6 snRNA specific Primer set(10μM)
|
0.2μM | ?0.4μM |
cDNA
|
? | 2μl |
rTaq DNA polymerase(5 U/μl)
|
1U | ??? 0.2μl |
RNase free H2O
|
? | To 20μl |
|
|
95℃ for 3 minutes’ hold,?
40 cycles of:
Cui, W., Q. Li, et al. "MiR-126-3p regulates progesterone receptors and involves development and lactation of mouse mammary gland." Molecular and Cellular Biochemistry 355(1): 17-25.
Zhang, C., J. Zhang, et al. "High level of miR-221/222 confers increased cell invasion and poor prognosis in glioma." Journal of Translational Medicine 10(1): 119.
Li, H. M., C. M. Wang, et al. "MiR-15a Decreases Bovine Mammary Epithelial Cell Viability and Lactation and Regulates Growth Hormone Receptor Expression." Molecules 17(10): 12037-12048.
Chen, L., L. Han, et al. "VHL regulates the effects of miR-23b on glioma survival and invasion via suppression of HIF-1/VEGF and -catenin/Tcf-4 signaling." Neuro-Oncology 14(8): 1026-1036.
目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类:
1. RNA干扰研究工具
2. miRNA研究工具?
产品价格 本产品目录∑ 中标示的价格均为国内统一零售参」考价,全部为人民币价格。如果大█量定购时,在标准价格的基础上有不同程度的优惠。?
质量保证 凡吉玛公司的产品均有严格的质量保证。如果我们发现确实存在质量问题时,保证更换▓产品。如果在到货后一个月之内用户无提出异议,我们将视本产品为优良产品而不⊙再受理投诉▆事宜。提出产品异议(或投诉)时,切莫在产品使用完(或快使用完)后提出,以备本公司回收产品,确认产品︼质量。由于订错△产品而产生的退货情况,原则上由客户承担相关费←用。发生投诉事〒宜时,公司只保证在产品价格额度范围之内酌情赔偿,恕不受理〓超过制品价格额度以上之部分。退款时需退还原始发∞票。
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